Подсчёт микроядер

Автоматический анализ микроядер

Анализ микроядерных образцов in-vitro и in-vivo на основе системы Metafer для исследований в области биодозиметрии, токсикологии и мутагенеза.

Микроядерные (MN) тесты используются в токсикологических исследованиях и радиационной биодозиметрии для количественной оценки воздействия различных факторов на повреждения ДНК. Такие анализы в настоящее время считаются наиболее приемлемыми и надёжными тестами для генотоксичных канцерогенов. Существуют две основные модели MN тестов: (a) анализ микроядер, полученных путем блока цитокинеза (далее метод называется in-vitro MN), и (b) анализ микроядер эритроцитов грызунов (далее метод называется in-vivo MN).

Система Metafer может выполнять съёмку изображений и анализ для обоих видов тестов, надёжно и без участия оператора. Автоматизированный анализ MN соответствует директивам OECD, и может выполняться в соответствии со Сводом международных требований к лабораторным исследованиям (GLP).

Метод in-vitro MN

Исследование микроядер, полученных путём блока цитокинеза – полномасштабная система измерения повреждений ДНК, цитостаза и цитотоксичности. Анализ заключается в добавлении к культурам клеток цитохалазина B (ингибитора митотического веретена, что препятствует цитокинезу). Вследствие этого клетки, которые завершили одно деление ядра, идентифицируются по своему двухъядерному виду. Случаи повреждения ДНК подсчитываются отдельно в двухъядерных клетках после одного деления.

Metafer автоматически сканирует препараты in-vitro MN, надёжно идентифицирует двухъядерные клетки (клетки, которые претерпели одно клеточное деление после обработки) и анализирует их на наличие микроядер. Одновременно подсчитываются все одноядерные клетки, обеспечивая обратную связь по скорости размножения клеток в культуре.

Результаты анализа отображаются в галерее клеток, показывая каждую отдельную проанализированную клетку вместе с соответствующим счётчиком микроядер. Все данные суммируются в виде гистограммы. Пользователь может выбрать классы клеток с наличием микроядер, отфильтровать галерею по выбранному критерию и, таким образом, быстро подтвердить автоматизированные результаты без необходимости изучения всех клеток. Морфология клеток и микроядер анализируется на основе наборов параметров, настраиваемых пользователем. Оптимизация параметров и, тем самым, установка стандартов подсчёта, выполняется с помощью автоматизированного средства самооптимизации. Автоматическая оптимизация может также использоваться для нахождения наилучших параметров обработки изображения.

Подсчёт микроядер с помощью Metafer производится не только удобно и надёжно, но и чрезвычайно быстро. Этот метод стал очень важным инструментов в радиационной биодозиметрии. Несколько независимых исследований в престижных научных журналах показали, что подсчёт микроядер с помощью Metafer – очень важный инструмент для оценки полученной дозы радиации, особенно в случаях, когда допускается крупная авария с источниками ионизирующего излучения.

В токсикологии цитостатический эффект испытываемого соединения измеряется путём оценки соотношения между одно-, двух- и многоядерными клетками (CBPI). Этот метод также является частью соответствующей директивы OECD (директива OECD № 487). Metafer автоматически анализирует состояние клеток путём морфологического анализа ядер, и подсчитывает CBPI. Система полностью совместима с соответствующей директивой OECD, а также с нормативами GLP.

Метод in-vivo MN

В in-vivo MN исследовании (MN анализ эритроцитов грызунов) обычно используется костный мозг или периферическая кровь грызунов, которые были обработаны испытываемым веществом. Красные клетки крови в образце классифицируются на полихроматические (PCE; незрелые) или нормохроматические (NCE; зрелые) эритроциты. В PCE основное ядро вытолкнуто, а микроядро осталось в цитоплазме, которая была бы безъядерной. Увеличение частоты полихроматических эритроцитов с микроядрами у обработанных животных указывает на индуцированное повреждение хромосом. PCE и NCE различаются по цвету (после применения окрашивания по Май-Грюнвальду-Гимзе), и соотношение между этими двумя популяциями несёт информацию о задержках клеточного цикла вследствие токсических побочных эффектов исследуемого вещества. Очень важно знать, что для автоматизации подсчёта в тесте in-vivo MN требуются образцы, подготовленные из растворов клеток, очищенных в колонне, и что рекомендуется подготавливать образцы путём центрифугирования клеток. Только этот способ подготовки препаратов гарантирует надёжный и безошибочный автоматический анализ.

Автоматизация теста in-vivo MN в системе Metafer выполнена для рабочего процесса без участия оператора. Система автоматически получает изображения препаратов и анализирует диапазон интенсивностей окрашивания. С учётом качества окрашивания, автоматически различаются PCE и NCE по их цвету. Система достаточно надёжна, чтобы не ошибаться при различном качестве окрашивания и при различных соотношениях PCE и NCE (например, если используется периферическая кровь вместо костного мозга). Когда определены цвета PCE и NCE, каждая клетка относится к одному из классов, и производится определение микроядер. Обычно система сканирует и анализирует более 1000 клеток в минуту.

Автоматизация in-vivo MN теста с помощью Metafer полностью удовлетворяет требованиям соответствующей директивы OECD (директива OECD № 474) и рамочным требования нормативов GLP.

Требуется помощь?

Связаться с нами »

Свяжитесь напрямую с MetaSystems или найдите ближайшего к вам партнёра MetaSystems.