Imagerie multicouleur

Analyse FISH multicouleur avec Isis

le logiciel upgrade pour FISH multicouleur (mFISH) et chromosome banding multicouleur (mBAND).

Les essais FISH Multicouleur sont utilisés pour une évaluation précise de réarrangements chromosomiques complexes. Les essais sont basés sur des combinaisons de fluorochromes qui sont interprétés par le logiciel d´analyse. La méthode de marquage combiné multiplie de façon efficace le nombre de marquages utilisables sans quoi on serait limité à 7 ou 8 fluorochromes distinctes individuellement.

FISH en multicouleurs

La FISH multicouleur (mFISH) est une méthode pour faciliter l'analyse de chaque chromosome individuel ou un morceau de chromosome dans une métaphase. Ainsi des chromosomes marqueurs, des réarrangements chromosomiques complexes et toutes les aberration numériques peuvent être affichées simultanément dans une seule expérience d´hybridation. En analysant les ratios de couleurs de tous les pixels, le logiciel MetaSystems mFISH/mBAND attribue de façon non ambiguë n´importe quelle région de l'image à la classe chromosomique correspondante. L´approche mFISH basée sur filtres facilite la vérification directe des signaux originaux de l´hybridation et évite ainsi d´effectuer des expériences supplémentaires de contrôle avec des peintures chromosomiques classiques.

MetaSystems fournit une solution intégrée, reáctifs-plus-système pour la mFISH. Le kit de sonde mFISH 24XCyte consiste d'un ensemble de peintures chromosomiques avec des combinaisons spécifiques de fluorochromes qui couvrent tout le genome humain. Des kits mFISH sont également disponibles pour la souris, le rat et pour les chromosomes d´ovaires de hamster chinois (21XMouse, 22XRat, 12XCHamster).

Des outils variés pour la séparation précise des chromosomes et pour leur classification rapide aident à accélérer le flux de travail. La classification des chromosomes est faite soit à partir du banding DAPI ou en utilisant les combinaisons de fluorochromes. Les chromosomes mFISH peuvent être affichés en trois modes différents de pseudo-couleurs pour faciliter l'analyse: saturation maximale (couleurs solides), image DAPI affichée en pseudo-couleurs et image en pseudo-couleurs standard.

L'analyse des images mFISH avec Isis est facile, même si des aberrations complexes sont présentes. Les outils Info Pixel / Info Pixel Etendue affichent la classe chromosomique attribuée au pixel sélectionné. La fiabilité de l´index d'attribution peut également être affichée. L'affichage en Fausse Couleurs Binaires transforme pratiquement l'image mFISH en une série d'hybridations avec 3 peintures chromosomiques individuelles. Cet outil a été introduit pour faciliter l'analyse d´images mFISH avec de nombreux réarrangements chromosomiques qui ne peuvent pas être identifiées "d'un simple coup d´oeuil". Des signatures de couleurs ambiguës peuvent être exclues en option de la classification. De cette façon, des régions avec une hybridation insuffisante sont facilement identifiées et rendues invisibles. La Galerie de Fluorochromes est une fenêtre séparée dans laquelle tous les cinqs canaux de couleurs sont affichés pour un chromosome sélectionné. De plus, l'image en fausse couleur, une image DAPI inversée et les profils d'intensité des fluorochromes sont affichés. Grâce à la Galerie de Fluorochromes l'identification de réarrangements est extrêmement simple.

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Banding multicouleur

Le banding chromosomique multicouleur (mBAND), une technique propriétaire de MetaSystems, utilise principalement la technique de la FISH multicouleur (mFISH) et l'applique à la détection de réarrangements intra-chromosomiques. En détail, les sondes (sondes XCyte mBand) marquées avec différentes proportions de deux ou plus fluorochromes sont hybridés sur une seule paire chromosomique. Chaque sonde consiste de peintures chromosomiques partielles qui se chevauchent. Les ratios d´entensité fluorescente changeant au long des chromosomes sont utilisés par le logiciel Isis pour attribuer différentes pseudo-couleurs à des régions chromosomiques spécifiques. Le résultat est un motif reproductible de banding en fausse-couleur à haute résolution permettant l'identification et la localisation d'aberrations intra-chromosomiques.

La résolution du motif mBAND peut être modulé dans le but d´obtenir l'image la plus appropriées pour l´analyse. Une résolution équivalente à un niveau de 550 bandes en bandes G peut facilement être atteint. Les motifs mBAND sont ne dépendent pas de la condensation de la chromatine. Même si les bandes mBAND ressemblent à un motif de banding artificiel, elles peuvent être corrélées avec les bandes ISCN en utilisant la galerie de fluorochromes d´Isis. De ce fait, une localisation précise des points de cassure est possible.

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