多色成像

Isis 多色荧光信号分析

多色 FISH(mFISH)和多色染色体显带(mBAND)软件升级模块。

多色 FISH 实验主要应用于精确分析复杂的染色体重排,该实验主要基于不同的荧光染料组合实验然后通过软件分析结果。应用荧光组合标记的方法有效的增加了可用标记的数量,否则最多只能使用7或8种可分辨的荧光标记。

多色 FISH

多色 FISH(Multicolor FISH, mFISH)是一种分析中期分裂相中每个染色体或部分染色体的方法。因此,在一个荧光杂交实验中可以同时观察到标记染色体,复杂的染色体重排和染色体数目的畸变。MetaSystems 的 mFISH/mBAND 软件模块能够通过分析不同荧光通道颜色的比例将图像的所有区域准确分配到相应的染色体分类中。由于基于荧光滤光片的 mFISH 方法能够对原始的荧光信号进行直接观察,因此远远胜过需要对照实验的传统染色体染色方法。

MetaSystems 同时也为 mFISH 提供了一系列系统附加试剂。24XCyte mFISH 试剂盒由带有特定荧光染料组合的一系列染色体探针组成,可以覆盖全部人类染色体基因组。另外也有适用于小鼠,大鼠和中国仓鼠卵巢(CHO)染色体的mFISH 试剂盒(21XMouse, 22XRat, 12XCHamster)。

Isis 具有精确分隔染色体和快速染色体分类的工具从而进一步加快了工作流程。同时用户可以用 DAPI 的显带或者应用荧光染料组合模式来完成染色体分类。此外也有三个不同的 mFISH 伪彩色显示模式帮助用户进行分析:显示最大饱和度(单色)伪彩色模式,叠加 DAPI 复染图像的伪彩色模式和标准伪彩色模式。

在 Isis 中分析涉及复杂的染色体畸变的 mFISH 图像也是很容易。其中像素信息/扩展像素信息工具可以根据鼠标取点的像素值显示染色体分类信息,同时也会显示相应分类信息的可靠性指数。同时伪彩二元化显示模式可将 mFISH 的图像转化为只单独显示三个染色体的模式。当发生大量染色体重排时通常仅仅看一眼是无法辨别的,伪彩二元化显示工具大大促进了这种情况下的 mFISH 图像分析,因为不明确的荧光颜色信号可以选择性的排除在观察分类中,也会很容易的识别和排除荧光染色不足的区域。另外,单色图库模式具有独立的显示窗口,可分别显示选中的染色体的五个荧光通道,也会同时显示伪彩色图像、反转的 DAPI 图像以及荧光强度曲线。单色图库的显示模式让识别染色体重排的工作变得更加简单明确。

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多色染色体显带

多色染色体显带 (Multicolor Banding, mBAND)是 MetaSystems 的特有的技术,基于荧光染料的组合分析检测分析染色体内重排。具体来说就是应用带有两种或更多荧光染料组合的探针(XCyte mBand 探针)染色某一个染色体对。每种探针都由一系列部分重叠的染色体探针组成。Isis 软件会根据染色体上荧光强度比例的变化给特定的染色体区域分配相应的伪彩色,然后用户可以通过具有可重复性的高分辨率伪彩色显带模式来识别和定位染色体内畸变。

为了获取分析所用的最佳图像,mBAND 的显带分辨率是可以调节的,并且可以轻松的达到等同于 G-显带的 550 条带分辨率的显带水平,而且 mBAND 结果独立于染色质凝聚。尽管 mBAND 显带与人工显带模式类似,但是通过 Isis 中单色图库功能可以直接跟 ISCN 显带相关联,因此也可以用来精确定位染色体的断裂点。

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